干细胞通过其高度的自我更新能力和分化潜力,成为多种生物医学和药学研究的理想选择,特别是在再生医学领域内展现出卓越的应用价值。因此,开发能够自动鉴定和筛选干细胞集落或克隆的技术显得尤为重要。高效的自动化干细胞筛选和分离是实现这一目标的关键,可以促进干细胞在临床和研究领域的广泛应用。
赛多利斯的CellCelector Flex全自动无损细胞分离系统使用一种具有高特异性的、温和的自动化机械转移方案,可最大限度地提高所挑选的干细胞克隆的存活率和克隆性,同时保持其多能性特征。
CellCelector Flex全自动无损细胞分离系统提供三种可灵活更换的全自动机械分离模块,广泛应用于单个干细胞、干细胞集落或集落特定部位的精确分离
为了挑取贴壁克隆,CellCelector Flex全自动无损细胞分离系统结合了非常温和的横向加纵向刮擦的挑取模式,在刮擦的同时进行吸取,可以轻柔地将克隆从培养皿或饲养细胞层的底部剥离。
在干细胞分离和转移的过程中,CellCelector Flex 提供全流程可视化图像记录,有效帮助验证分离和转移步骤的干细胞质量。该设备在每次操作后能够自动更换挑头,这一设计不仅防止了交叉污染,还有助于维持干细胞的活性,从而最大限度地保留干细胞的多能性和分化潜力。
图2.通过碘化丙啶染色法对手动分离(左图)和CellCelector Flex自动分离(右图)的干细胞集落活性进行对比。其中死亡细胞呈红色,明显观察到通过CellCelector Flex分离的干细胞集落死亡细胞更少,更加保护细胞活性。
图3.CellCelector Flex细胞筛选系统分离出的干细胞集落转移至新培养皿后的相差成像。可以观察到在新培养皿自动传代 3 天(左)和5天(右)后集落明显增大,说明转移后克隆正常生长。
图4. 用赛多利斯的CellCelector Flex细胞筛选系统传代的胚胎干细胞集落的多能性相关标志物的免疫化学表达分析。分别采用多能性相关标记 Oct4、SSEA-1、Tra-1-60 和 Nanog 对 hESC 集落进行了染色,其中多能性表面标志物 Tra-1-60 (B), 多能因子Oct4 (C)和Nanog (D) 呈阳性结果,证明CellCelector Flex自动分离保留了其多能性;分化标志物 SSEA-1 (E) 呈阴性结果,说明集落仍具有体外分化潜能。
得益于其高内涵成像功能和精确的干细胞分离性能,CellCelector Flex 能够根据集落的形态特性和细微差异精准分离出特定区域,如集落的分化和未分化部分。此外,它还可以从同一集落中分离出大小形状均一的子集落,并将其转移到多个复制板中进行对照和质量控制。CellCelector Flex 的稳定筛选和挑取性能确保了样本的高质量和可重复性,有效避免了手动干细胞分离可能引起的批次间差异。
iPSC在再生医学中具有非常重要的治疗潜力,有望用于开发细胞和组织退行性疾病的新疗法。而基因整合偏离会出现具有不同表型的单细胞,因此基因编辑后的iPSC单细胞克隆筛选至关重要。CellCelector Flex创新的基于纳米孔和图像验证的高通量单细胞克隆筛选技术(HT-NIC),简化iPSC单细胞克隆池建立流程。能够在单次筛选中同时验证单克隆性、生长率以及功能验证。